水产养殖是我国的传统优势产业，目前已成为我国农业经济的重要组成部分。然而，近年来随着水产养殖密度的增加，鱼类病害不断增多，造成了巨大的经济损失。因此，建立有效、准确和快速的水产动物病原检测技术是当前及今后一段时间内，迫切需要解决的问题。本文主要介绍了近年来出现的一些水产动物病原快速检测技术，以期为有效防治水产动物疾病提供参考。

荧光定量PCR检测

荧光定量PCR（Q-PCR）是指通过实时荧光定量PCR仪对目的基因进行定量检测的一种方法。目前，已有许多公司开发出了基于荧光定量PCR的快速检测技术，如基础的染料法、TaqMan探针法、循环阈值（Ct值）法、多重荧光定量PCR等。荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强等优点，且无需对PCR产物进行扩增和检测，因此成为基因编辑技术应用于病原检测最常用的方法之一。

近年来，荧光定量PCR检测方法被广泛应用于各种生物及环境样品中病原菌的检测。但是该技术也存在一定的局限性，如荧光定量PCR需要预先进行引物设计和扩增条件优化；荧光定量PCR检测需经过严格的质控和人工操作程序；对外源DNA或RNA进行定量时，需要通过多重PCR等方式来提高扩增效率等。

荧光定量PCR探针法和染料法的对比

纳米材料检测

基因编辑检测

基因编辑检测技术是通过对病原体相关基因进行定点、靶向编辑，从而使病原体丧失致病性。在基因编辑技术中，CRISPR/Cas9系统因其具有高通量、高效性、专一性等特点而备受关注。目前，国内外学者已经成功将CRISPR/Cas9系统应用于多种细菌、病毒等病原体的基因编辑，包括嗜水气单胞菌、沙门氏菌、肠道病毒71型以及嗜酸性肉芽肿病毒等。CRISPR/Cas9技术是一种以“基因打靶”为原理的基因编辑技术，通过在外源DNA或RNA上设计和添加Cas9蛋白DNA或RNA引导序列，对特定基因进行定点敲除或敲入，从而达到所需目的。该技术具有操作简便、安全性高等特点，可有效用于水产动物病原菌的检测。通过将CRISPR/Cas9基因编辑系统与荧光定量PCR技术结合，可以构建出一种新型的水产品病原快速检测方法。该方法通过对外源DNA或RNA进行定点、定向编辑，从而实现快速、准确的病原检测。相比于传统荧光定量PCR检测方法，该方法具有以下优点：（1）对病原菌的特异性更强；（2）缩短了病原检测时间；（3）不需要任何复杂的实验室条件；（4）所需时间短，不需要专业的操作人员等。

由于病原检测技术的不断发展，传统病原检测方法越来越不能满足实际生产中的需要，所以需要将分子生物学、微生物学、免疫学等技术与病原检测技术相结合，逐渐成为一种新型的病原检测方法。同时，随着水产养殖病害问题日益突出，病害防控中越来越重视病原检测技术的应用，使得各种新型病原检测技术在水产动物养殖过程中得到了广泛应用。在实际应用中根据具体情况选择合适的病原检测技术，能提高水产动物疾病防控水平和水产养殖产量。

作者：杨祎（大连海洋大学水产与生命学院研究生）

科学性审核：刘鹰（浙江大学生物系统工程与食品科学学院博士生导师）、刘鹏飞（大连海洋大学海洋科技与环境学院研究生导师）

策划：刘雅丹 武玥彤

校对：王嘉伟（实习）